高效液相色譜儀(HPLC)是分析實(shí)驗(yàn)室常用的測(cè)試儀器之一，其應(yīng)用越來越廣泛。此種儀器在使用過程中，難免會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問題，并將直接影響到所測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚預(yù)防和排除這些故障的發(fā)生，就可正確地使用儀器并最大限度地發(fā)揮儀器的性能。今天我們要從以下幾個(gè)方面和您分享下在使用高效液相色譜儀中需注意的幾個(gè)問題。

一、使用試管的問題

1、試管的潔凈問題

高效液相色譜分析法是一個(gè)很靈敏的分析方法，如果因使用不潔凈的試管，便會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。例如，在用甲醇作溶劑來溶解樣品時(shí)，所用的小試管是用橡膠塞來做蓋子的，因此，在每次進(jìn)樣時(shí)，都有一個(gè)保留時(shí)間固定的干擾峰存在，后經(jīng)證實(shí)，此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產(chǎn)生，換用玻璃試管后，干擾峰消除。

2、塑料試管的溶解問題

近年來，一次性塑料試管給試驗(yàn)人員帶來了極大的方便，但是，在使用過程中一定要注意有機(jī)溶劑對(duì)試管的溶解現(xiàn)象，在利用此種試管提取樣品時(shí)，有些有機(jī)溶劑(如氯仿等)對(duì)管壁有溶解現(xiàn)象，這些被溶解下來的物質(zhì)有時(shí)也能在檢測(cè)器上產(chǎn)生信號(hào)，從而干擾樣品的測(cè)定。這時(shí)，可用相同的實(shí)驗(yàn)條件先行試驗(yàn)一下，看看不含被抽提物時(shí)，提取液在檢測(cè)器上能否產(chǎn)生干擾信號(hào)，如確有干擾信號(hào)存在，就只能換用耐有機(jī)溶劑的玻璃試管了。

3、被測(cè)樣品在試管壁上的吸附問題

這個(gè)問題也應(yīng)引起注意，否則也會(huì)影響測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性，在治療藥物監(jiān)測(cè)(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中，有些被測(cè)藥物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃試管的管壁上，因此，操作中宜采用聚丙烯管，為防止提取中吸附現(xiàn)象的發(fā)生，可采用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑，可有效地防止吸附。

二、操作進(jìn)樣閥的問題

目前，在分析型高效液相色譜儀中常用的進(jìn)樣閥是7725型進(jìn)樣閥，其內(nèi)部的六通閥結(jié)構(gòu)使進(jìn)樣操作非常方便，但是，如果使用不當(dāng)，也會(huì)帶來問題。例如，在高效液相色譜法的試驗(yàn)過程中，有時(shí)會(huì)有異常色譜峰的出現(xiàn)以及重現(xiàn)性不好的問題，這主要是由于操作方法不當(dāng)所引起，要想解決此類問題，需從以下幾個(gè)方面入手。

1、進(jìn)樣量的控制

用進(jìn)樣閥來進(jìn)樣時(shí)，閥內(nèi)的樣品環(huán)是定量的，(一般分析型進(jìn)樣閥的樣品環(huán)體積為20ul)，由于進(jìn)樣時(shí)，注射到進(jìn)樣閥內(nèi)的樣品溶液在樣品環(huán)的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此，要想使樣品環(huán)中充滿樣品溶液，從而使用進(jìn)樣閥來準(zhǔn)確地定量，則必須使進(jìn)樣量大于樣品環(huán)體積的2倍。如果用注射器來控制進(jìn)樣量，則最大只能注射樣品環(huán)體積1/2的量，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導(dǎo)致定量分析的誤差。

2、進(jìn)樣閥的清潔問題

如果樣品環(huán)中有上次進(jìn)樣時(shí)樣品的殘留，必然會(huì)污染下次注射進(jìn)的樣品，為防止這種現(xiàn)象的發(fā)生，應(yīng)按下列步驟操作：a.進(jìn)樣閥有2個(gè)位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時(shí)，以注射器將流動(dòng)相注入進(jìn)樣閥內(nèi)清洗幾次，每次用量大約40ul；b.然后將進(jìn)樣閥板手扳至INJECT位置時(shí)，再以流動(dòng)相清洗幾次，每次用量還是40ul；c.最后，再將樣品注射到進(jìn)樣閥里。

按照上述的步驟操作，可以避免由進(jìn)樣閥引起的污染，從而使干擾峰消除并提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3、進(jìn)樣閥溢流管的堵塞

有時(shí)，進(jìn)樣閥的溢流管會(huì)發(fā)生堵塞現(xiàn)象，向進(jìn)樣閥內(nèi)注射樣品時(shí)，注射針推不動(dòng)。此故障是由于溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由于溶解樣品的流動(dòng)相用的是鹽溶液，而其中的鹽在溢流管的排空端口處結(jié)晶所致。此時(shí)，可用小燒杯盛少量蒸餾水對(duì)溢流管口稍加浸泡，端口處鹽的結(jié)晶就能被溶解掉，故障排除。如能在每次進(jìn)樣完成之后，用蒸餾水反復(fù)沖洗至溢流管中的鹽分全部沖出，則可避免此故障的發(fā)生。

三、流動(dòng)相(MOBLLE PHASE)的問題

甲醇和乙腈在高效液相色譜分析法中常常被用來配制流動(dòng)相。高效液相色譜法中常用的試劑最好是高等級(jí)的專用試劑，如色譜純?cè)噭?。在要求不太?yán)格時(shí)，優(yōu)級(jí)純甚至分析純的試劑也能用。高效液相色譜分析法中常用的是紫外檢測(cè)器，因此，從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來考慮，應(yīng)該使用紫外吸收小且雜質(zhì)含量少的色譜純?cè)噭?

1、流動(dòng)相的過濾