23.固定液的選擇：
①按極性相似原則選擇：
極性相似，溶解度大，分配系數(shù)大，保留時間長；
②按官能團相似選擇：
酯類——酯或聚酯類固定液；
醇類——聚乙二醇固定液。
③按主要差別選擇：
各組分間沸點是主要差別——非極性固定液；極性為主要差別——極性固定液。
④選擇混合固定液：
對于難分離的復(fù)雜樣品，可選用兩種或兩種以上固定液。
24.聚合物固定相：
既可作為固體固定相，也可作為載體，又稱高分子多孔微球。物質(zhì)在其表面既存在吸附作用，又存在溶解作用。
(1)具有較大的比表面積，表面孔徑均勻；
(2)對非極性及極性物質(zhì)無有害的吸附活性，拖尾現(xiàn)象小，極性組分也能出對稱峰；
(3)由于不存在液膜，無流失現(xiàn)象，熱穩(wěn)定性好；
(4)機械強度和耐腐蝕性較好，系均勻球形，在填充柱色譜中均勻性、重現(xiàn)性好，有助于減少渦流擴散。
25.載氣種類的選擇：
檢測器的適應(yīng)性，載氣流速的大小。
26.柱溫的選擇：
(1)首先應(yīng)使柱溫控制在固定液的最高使用溫度(超過該溫度固定液易流失)和最低使用溫度(低于此溫度固定液以固體形式存在)范圍之內(nèi)。
(2)提高柱溫，可以改善傳質(zhì)阻力，有利于提高柱效，縮短分析時間，但降低了容量因子和選擇性，不利于分離。一般的原則是：在使最難分離的組分盡可能分離的前提下，盡量采用較低的柱溫，但以保留時間適宜，峰形不拖尾為度。
(3)柱溫一般選擇在接近或略低于組分平均沸點時的溫度。
(4)組分復(fù)雜，沸程寬的試樣，采用程序升溫。
27.載體和固定液含量的選擇：
配比：
固定液在載體上的涂漬量，一般指的是固定液與擔(dān)體的百分比，填充柱的配比通常在5%～25%之間。
配比越低，擔(dān)體上形成的液膜越薄，傳質(zhì)阻力越小，柱效越高，分析速度也越快。配比較低時，固定相的負(fù)載量低，允許的進(jìn)樣量較小。分析工作中通常傾向于使用較低的配比。
28.進(jìn)樣條件的選擇：
進(jìn)樣量應(yīng)控制在柱容量允許范圍及檢測器線性檢測范圍之內(nèi)，進(jìn)樣要求動作快、時間短，汽化室一般較柱溫高30~70°C。
29.提高色譜分離能力的途徑：
(1)塔板理論：
增加柱長，減小柱徑，即增加柱子塔板數(shù)；
(2)速率理論：
減小組分在柱中的渦流擴散和傳質(zhì)阻力，可降低塔板高度。
30.毛細(xì)管色譜柱的結(jié)構(gòu)特點：
(1) 不裝填料阻力小，長度可達(dá)百米的毛細(xì)管柱，管徑0.2mm；
(2)氣流單途徑通過柱子，消除了組分在柱中的渦流擴散；
(3)固定液直接涂在管壁上，總柱內(nèi)壁面積較大,涂層很薄，則氣相和液相傳質(zhì)阻力大大降低。
(4)毛細(xì)管色譜柱柱效高達(dá)每米3000～4000塊理論塔板，一支長度100米的毛細(xì)管柱，總的理論塔板數(shù)可達(dá)104～106。
31.毛細(xì)管色譜具有以下優(yōu)點：
(1)分離效率高：
比填充柱高10～100倍；
(2)分析速度快：
用毛細(xì)管色譜分析比用填充柱色譜速度；
(3)色譜峰窄、峰形對稱，較多采用程序升溫方式；
(4)靈敏度高，一般采用氫焰檢測器。
(5)渦流擴散為零。
32.毛細(xì)管色譜的類型：
(1)涂壁毛細(xì)管柱：
將固定液直接涂敷在管內(nèi)壁上。柱制作相對簡單，但柱制備的重現(xiàn)性差、壽命短。
(2)多孔層毛細(xì)管柱：
在管壁上涂敷一層多孔性吸附劑固體微粒，構(gòu)成毛細(xì)管氣固色譜。
(3)載體涂漬毛細(xì)管柱：
將非常細(xì)的擔(dān)體微粒粘接在管壁上，再涂固定液。柱效較涂壁毛細(xì)管柱高。
(4)化學(xué)鍵合或交聯(lián)毛細(xì)管柱：
將固定液通過化學(xué)反應(yīng)鍵合在管壁上或交聯(lián)在一起。使柱效和柱壽命進(jìn)一步提高。
高效液相色譜法
1.與氣相色譜相比液相色譜的優(yōu)點
與氣相色譜法相比，液相色譜法不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性及相對分子質(zhì)量的限制，只要求把樣品制成溶液即可，非常適合于分離生物大分子、離子型化合物，不穩(wěn)定的天然產(chǎn)物以及其他各種高分子化合物等。此外，液相色譜的流動相不僅起到使樣品沿色譜柱移動的作用，而且與固定相一樣，與樣品分子發(fā)生選擇性的相互作用，這就為控制和改善分離條件提供了一個額外的可變因素。而氣相色譜法采用的流動相是惰性氣體，對組分沒有親和力，僅起運載作用。
2.液相色譜特點：
高壓、高速、高效、高靈敏度、高沸點、熱不穩(wěn)定有機及生化試樣的高效分離分析方法。
3.高效液相相色譜儀的組成：
高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
4.流動相使用前必須脫氣：
常用的脫氣方法有：
低壓脫氣法(電磁攪拌、水泵抽空，可同時加熱或向溶劑吹氮氣)、吹氦氣脫氣法和超聲波脫氣法等。
5.梯度洗脫：
用兩種(或多種)不同極性的溶劑，在分離過程中按一定程序連續(xù)改變流動相中溶劑的配比和極性，通過流動相中極性的變化來改變被分離組分的分離因素，以提高分離效果。
