2019 年底至今爆發(fā)的新型冠狀病毒(COVID-19)給全球公共衛(wèi)生帶來了巨大挑戰(zhàn)。
為緩解這一困境,來自麻省理工學(xué)院和哈佛 Broad 研究所、麥戈文腦科學(xué)研究所的一支團(tuán)隊(duì)開發(fā)出了一種新的 COVID-19 檢測方法,能在 1 個小時內(nèi)完成檢測。作者包括著名 CRISPR 大牛張鋒教授,相關(guān)研究成果已經(jīng)提交到 bioRxiv。
但需要指出,由于這項(xiàng)技術(shù)仍處于非常初步的階段,還未在真實(shí)患者樣本中進(jìn)行檢測,因此團(tuán)隊(duì)也強(qiáng)調(diào),這種方法目前不能用于臨床上對 COVID-19 的診斷。
該方法基于 CRISPR,利用了張鋒團(tuán)隊(duì)此前開發(fā)的 SHERLOCK 技術(shù),可以快速檢測新冠病毒 RNA。
根據(jù) DeepTech 此前報道,實(shí)驗(yàn)證實(shí),基于 CRISPR-Cas13 的 SHERLOCK 技術(shù),在多種人類樣本(如唾液)中發(fā)現(xiàn)寨卡、登革熱等病毒的 RNA 序列,甚至一些與癌癥突變相關(guān)的序列。其對 RNA 和 DNA 的檢測靈敏度都達(dá)到了單分子級。
而且,張鋒團(tuán)隊(duì)還為更好地使用 SHERLOCK 開發(fā)了類似于驗(yàn)孕棒一樣的試紙檢測方法:不需要任何特殊設(shè)備,只需一張?jiān)嚰垼?span>SHERLOCK 就能顯示出病毒感染檢測結(jié)果,非常易于使用。
圖 | SHERLOCK 試紙檢測結(jié)果展示
用在 COVID-19 的檢測中,張鋒團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)了能與新冠病毒特異性結(jié)合的 RNA。一種 RNA 識別 COVID-19 的 S 基因,另一種 RNA 則識別 Orf1ab 基因。
在 RNA 找到新冠病毒后,RNA 上綁著的強(qiáng)力剪切酶(Cas13a)就會被釋放,切斷 RNA 物質(zhì)。與此同時,他們加入了一種目標(biāo) RNA,以判斷該剪切酶是否被釋放,RNA被剪斷與否則用試紙來檢測。因此該技術(shù)只需 1 小時就能判斷是否存在新冠病毒。
具體的檢測方案有以下三個步驟,適用于為 qPCR 檢測提取的 RNA 樣本:
1. 將提取的 RNA 進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),42°C 下孵育 25 分鐘;
2. 步驟 1 反應(yīng)物加入 Cas13 蛋白、兩種設(shè)計(jì)的 RNA,37°C 孵育 30 分鐘;
3. 將試紙條浸入步驟 2 的反應(yīng)體系中,等待反應(yīng) 2 分鐘。
研究團(tuán)隊(duì)表示,該檢測方法仍需進(jìn)一步的優(yōu)化、測試和臨床驗(yàn)證,以開發(fā)出用于檢測 COVID-19 患者樣本中新型冠狀病毒的簡單系統(tǒng)。同時,研究團(tuán)隊(duì)將為任何有興趣進(jìn)一步開發(fā)和使用此技術(shù)的組織免費(fèi)提供可能有用的信息和技術(shù)支持,包括共享可能支持潛在診斷開發(fā)的信息。