近日市場(chǎng)監(jiān)管總局批準(zhǔn)發(fā)布了《液體乳中三聚氰胺的快速檢測(cè)-拉曼光譜法》（KJ201908），本方法規(guī)定了液體乳制品中三聚氰胺快速測(cè)定方法。
1 范圍
本方法適用于生鮮乳、滅菌乳、巴氏殺菌乳、調(diào)制乳和發(fā)酵乳等液態(tài)乳制品中三聚氰胺含量的快速測(cè)定。
2 原理
樣品經(jīng)沉淀、溶劑提取，加表面增強(qiáng)拉曼試劑對(duì)信號(hào)增強(qiáng)，進(jìn)行拉曼光譜掃描。以704±10cm-1處的拉曼特征峰作為三聚氰胺定量基準(zhǔn)峰，以925±10cm-1或類似基質(zhì)中穩(wěn)定存在的拉曼峰為參比峰，根據(jù)三聚氰胺峰與參比峰的相對(duì)強(qiáng)度對(duì)三聚氰胺的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，內(nèi)置儀器內(nèi)進(jìn)行判別。
3 試劑和材料
除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的二級(jí)水。
3.1 試劑
3.1.1 三氯乙酸。
3.1.2 三氯乙酸溶液（5%）：準(zhǔn)確稱取三氯乙酸（3.1.1）50 g于1 L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻后備用。
3.1.3 表面增強(qiáng)試劑：金或銀納米粒子溶膠，或相當(dāng)者。
注：表面增強(qiáng)試劑的參考配制方法：
納米金溶膠：取100mL0.01%氯金酸（AuCl3?HCl?4H2O）水溶液加熱至沸，劇烈攪拌下準(zhǔn)確加入1.0mL 1%檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7）水溶液，金黃色的氯金酸水溶液在2min內(nèi)變?yōu)榧t色，繼續(xù)煮沸15min，冷卻后用蒸餾水補(bǔ)加到100mL。增強(qiáng)試劑配制用水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
納米銀溶膠：取200mL1.0mM硝酸銀（AgNO3）水溶液加熱沸騰，劇烈攪拌下逐滴準(zhǔn)確滴加5.0mL1%檸檬酸三鈉（Na3C6H5O7）水溶液，持續(xù)煮沸1h，溶液變?yōu)榛揖G色，冷卻后用蒸餾水補(bǔ)加到200mL。增強(qiáng)試劑配制用水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。
3.1.4 促凝劑：金溶膠的促凝劑：稱取5.85 g氯化鈉，溶于100 mL水中，搖勻，備用，或配制成其他相當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)鹽溶液。銀溶膠的促凝劑：稱取5.85 g氯化鈉和2 g氫氧化鈉，溶于100 mL水中，搖勻，備用，或配制成其他相當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)鹽溶液。
3.2 參考物質(zhì)
三聚氰胺參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量見(jiàn)表1，純度≥99%。
3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液（500 μg/mL）：精密稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（3.2）適量，分別置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為500 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。于4℃避光保存，有效期1個(gè)月。
4 儀器和設(shè)備
4.1 便攜式拉曼光譜儀
穩(wěn)頻激光光源：發(fā)射波長(zhǎng)為785±1 nm，線寬<0.1 nm，能量≥250 mW；光譜分辨率≤15 cm-1；光譜響應(yīng)范圍500 cm-1~2000 cm-1，或大于該響應(yīng)范圍。
4.2 移液器：200 μL、1 mL和5 mL。
4.3 渦旋振蕩器。
4.4 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥6000 r/min。
4.5 電子天平：感量為0.01 g。
4.6 塑料具塞離心管：2 mL。
5 分析步驟
5.1 試樣的提取
取0.5 g樣品加到2 mL離心管中，再加入1ml 5%三氯乙酸溶液，渦旋30 s混勻；放入離心機(jī)，以不低于6000 r/min轉(zhuǎn)速離心1 min；上清液備用。
5.2 測(cè)定步驟
5.2.1 拉曼光譜儀器參考條件
激光能量≥250 mW，數(shù)據(jù)采集時(shí)間≥2 s。
5.2.2 測(cè)定
在儀器樣品池中依次加入100 μL促凝劑，100 μL表面增強(qiáng)試劑，50 μL樣品（5.1），快速搖晃均勻，等待20 s檢測(cè)（檢測(cè)需在樣品加入后1 min內(nèi)完成）。
5.3 質(zhì)控試驗(yàn)
每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。
5.3.1 空白試驗(yàn)
稱取空白試樣，按照5.1和5.2步驟與樣品同法操作。
5.3.2 加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)
準(zhǔn)確稱取空白試樣10 g置于15 mL具塞離心管中，加入50 μL三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液（500 μg/mL）（3.3），使三聚氰胺濃度為2.5 mg/kg，按照5.1和5.2步驟與樣品同法操作。
6 結(jié)果判定要求
