儀器儀表商情網訊:追溯歷史,流式細胞儀走過了42年的發(fā)展歷程(1973-2015),在這四十多年的發(fā)展歷程中,流式細胞儀器在結構上發(fā)生了一系列的演變:由簡單到復雜、由單激光到多激光、由單色到多色、由分析到分選、由空氣激發(fā)到石英杯激發(fā)、由標配型到特殊定制型等??傮w來說,流式細胞儀的硬件發(fā)展遠超科研發(fā)展需要,但應用技術相對滯后。
而據(jù)第三軍醫(yī)大學醫(yī)學分析測試中心萬瑛教授介紹,多色流式(Multi-color Flow Cytometry)指同時使用多種(四色以上)顏色熒光標記的流式檢測與分析,該技術是隨著新熒光分子的不斷問世和流式細胞儀分析參數(shù)的增加而出現(xiàn)的,是目前實現(xiàn)多參數(shù)細胞表型檢測的主要手段。
不過,傳統(tǒng)的流式技術主要基于對熒光發(fā)射光譜的檢測,但熒光基團發(fā)射光譜一般比較寬,其間往往會發(fā)生重疊。不僅限制了檢測通道的數(shù)量(<20個),還會帶來嚴重的串色問題,很多通道的信號需要復雜的補償計算。
為了解決這些問題,最新的質譜流式細胞術(CyTOF)應運而生。據(jù)萬瑛介紹,傳統(tǒng)的流式技術主要使用各種熒光基團作為抗體的標簽,使用激光器和光電倍增管作為檢測手段,而CyTOF用金屬元素偶聯(lián)抗體作為標記手段,以ICP質譜為檢測手段,通過這些改進,質譜流式技術巧妙的實現(xiàn)了更多參數(shù)的檢測??傮w來說, CyTOF具有很多優(yōu)勢:通道多,通道數(shù)>110個,檢測范圍88-210Da;無漏光,通道間相互影響小于0.3%,無需計算補償;背景低,標記元素在細胞內含量極低(<1原子/細胞)等。不過,目前國內的CyTOF產品還比較少。
大家都知道,最近的諾貝爾醫(yī)學獎給了兩位干細胞研究者,John Gurdon和Shinya Yamanaka,以獎勵他們在干細胞研究和體細胞重編程領域的卓越貢獻,而流式細胞術天生就是在臨床和研究領域分析、鑒定和分離干細胞和祖細胞的理想工具。近20年來,隨著流式細胞儀及其檢測技術的日臻完善,樣品制備、細胞標記、軟件開發(fā)等方面不斷獲得新突破,使得流式細胞儀已廣泛應用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規(guī)工作,成為細胞分選,細胞周期分析,DNA倍體測定,免疫活性細胞分型純化,血細胞分型分類,藥物在細胞中的分布,細胞凋亡等工作中重要的研究工具。
從儀器類型上來說,目前市面上銷售的主要是兩種流式細胞儀,一種是分析式流式細胞儀,細胞樣本經這種儀器分析后最終進入廢液桶,不能回收利用;另一種是分選型流式細胞儀,它既能進行流式分析,還能對分析的目的細胞進行分選??傮w來說,市場上分析型的產品多于分選型。